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水浴鍋在DNA片段的純化與回收中的應(yīng)用

水浴鍋在DNA片段的純化與回收中的應(yīng)用

1.從瓊脂糖凝膠中回收DNA片段

(1)柱平衡步驟:向吸附柱CB2中(吸附柱放入收集管中)加入500μl的平衡液BL,12000rpm離心1min,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱重新放回收集管中。

(2)將單一的目的DNA條帶從瓊脂糖凝膠中切下(盡量切除多余部分)放入干凈的離心管中,稱(chēng)取重量。

(3)向膠塊中加入等倍體積溶液PC,50℃水浴鍋放置10min,其間不斷溫和地上下翻轉(zhuǎn)離心管,以確保膠塊充分溶解。

(4)將上一步所得溶液加入一個(gè)吸附柱CB2中(吸附柱放入收集管中),12000rpm離心1min,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱CB2放入收集管中。

(5)向吸附柱CB2中加入500μl漂洗液PW,12000rpm離心1min,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱CB2放入收集管中。

(6)重復(fù)操作步驟(5)。

(7)將吸附柱CB2放入收集管中,12000rpm離心2min,盡量除去漂洗液。將吸附柱置于室溫放置數(shù)分鐘,徹底晾干。

(8)將吸附柱CB2放入一個(gè)干凈的離心管中,向吸附膜的中間位置懸空滴加適量的洗脫緩沖液EB,室溫放置2min。

(9)12000rpm離心2min,收集DNA溶液。

2.從PCR反應(yīng)液或酶切反應(yīng)液中回收DNA

(1)柱平衡步驟:向吸附柱CB2中(吸附柱放入收集管中)加入500μl的平衡液BL,12000rpm離心1min,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱重新放回收集管中。

(2)估計(jì)PCR反應(yīng)液或酶切反應(yīng)液的體積,向其中加入等倍體積溶液PC,充分混勻。

(3)將上一步所得溶液加入一個(gè)吸附柱CB2中(吸附柱放入收集管中),室溫放置2min,12000rpm離心1min,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱放入收集管中。

(4)向吸附柱CB2中加入500μl漂洗液PW,12000rpm離心1min,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱CB2放入收集管中。

(5)重復(fù)操作步驟(4)。

(6)將吸附柱CB2放回收集管中,12000rpm離心2min,盡量除去漂洗液。將吸附柱CB2室溫放置數(shù)分鐘,徹底晾干。

(7)將吸附柱CB2放入一個(gè)干凈的離心管中,向吸附膜中間位置懸空滴加適量的洗脫緩沖液EB,室溫放置2min。

(8)12000rpm離心2min,收集DNA溶液。


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