菌種的制備是指將保存的菌種進行活化,再經(jīng)搖瓶或種子罐等逐級擴大的過程。種子擴大培養(yǎng)增加菌體的數(shù)量,滿足工業(yè)化生產(chǎn)對大量菌種的需求。菌體達到一定濃度不僅是高效率和高質(zhì)量生產(chǎn)的保證,而且是縮短發(fā)酵周期、降低生產(chǎn)成本的必然要求。種子擴大培養(yǎng)可以提升種子生產(chǎn)性能。首先,通過營養(yǎng)物質(zhì)的充分供應(yīng)和適宜環(huán)境的控制,可激發(fā)菌體的新陳代謝活力,讓菌體生長代謝旺盛;其次,在擴大培養(yǎng)過程中通過調(diào)節(jié)培養(yǎng)基組成、發(fā)酵溫度、pH等因素逐步向生產(chǎn)階段的真實環(huán)境逼近,調(diào)理菌體的代謝,讓菌體在快速增殖的同時使菌體的各項生理性能向最適宜生產(chǎn)需要的方向趨近。菌種經(jīng)過擴大培養(yǎng)后,以優(yōu)勢菌進行生產(chǎn),可以減小雜菌污染概率,減少“倒罐”現(xiàn)象,這是成功生產(chǎn)的保障。
菌種是從事微生物學(xué)及生命科學(xué)研究的基本資料,因此,菌種保藏是一項重要的基礎(chǔ)性工作。菌種保藏主要是根據(jù)微生物的生理生化特點,人工創(chuàng)造條件,使孢子或菌體的生長代謝活動盡量降低,以減少其變異。
需要的器材與試劑
1.器材
恒溫培養(yǎng)箱,恒溫搖床,250mL錐形瓶,無菌移液器,接種環(huán),無菌甘油,無菌離心管(5mL)等。
2.試劑
菌種:酵母(Candida sp.)。
培養(yǎng)基:葡萄糖20.0g/L,酵母膏6.0g/L,磷酸二氫鉀5.0g/L,硫酸鎂0.25g/L,pH 5;固體培養(yǎng)基另加瓊脂20g/L。
菌種的培養(yǎng)和保藏
1.菌種的活化
將冰箱保藏的斜面菌種用接種環(huán)轉(zhuǎn)接入新鮮的斜面培養(yǎng)基后,28℃恒溫培養(yǎng)48h。如果冰箱保藏菌種活力較低,可以重復(fù)上述操作進行多次傳代培養(yǎng),以恢復(fù)菌種的活力。
2.菌種的擴大培養(yǎng)
將活化好的酵母菌轉(zhuǎn)接入裝有液體培養(yǎng)基的錐形瓶中,250mL錐形瓶中的裝液量為30~50mL,接種量為一環(huán);在恒溫搖床里28℃恒溫振蕩培養(yǎng)48h,搖床轉(zhuǎn)速為170~200r/min。
3.菌種的保藏
(1)斜面保藏 將恢復(fù)生長活力的斜面菌種放入冰箱中進行低溫保藏。要求在30天左右進行傳代復(fù)活培養(yǎng)。
(2)甘油保藏 用無菌移液器取2mL生長良好的發(fā)酵液,于超凈工作臺上轉(zhuǎn)入無菌離心管中,然后加入1mL無菌甘油,蓋緊頂蓋后于振動器上將甘油和發(fā)酵液混合均勻。迅速置于-70℃冷凍保藏