用二氯甲烷抽提血清TG,同時(shí)加入硅酸去除磷脂、游離甘油、甘油一酯、部分甘油二酯及蛋白。TG經(jīng)氫氧化鉀皂化生成甘油,酸化后以過碘酸氧化甘油產(chǎn)生甲醛,用亞砷酸還原過剩的過碘酸后,甲醛與變色酸在硫酸溶液中加熱產(chǎn)生紫紅色反應(yīng),進(jìn)行比色測定。本法根據(jù)Van Handel等( 1957) 及Carlson法( 1963)改進(jìn)而來。
1.抽提試劑
( 1)二氯甲烷( HPLC級)。
( 2)生理鹽水。
( 3)硅酸:用去離子水洗3次,去除細(xì)顆粒,然后用甲醇洗2次,用布氏漏斗( Whatman #42濾紙)過濾,空氣干燥。用前置65℃干燥箱烘干至少72小時(shí),干燥器內(nèi)貯存。
2.皂化試劑 ( 1) 0.25% KOH乙醇液:
制備5% KOH水溶液100ml,取5ml用無水乙醇稀釋至100ml,臨用當(dāng)天配制,用超聲波去氣泡。
( 2) 0.1mol/L H2SO4:
濃H2SO46.0ml用蒸餾水稀釋至1L。
3.氧化、還原、顯色試劑過碘酸鈉( NaIO4) :
將1.34g NaIO4溶于1L蒸餾水中。
( 2)亞砷酸鈉( As2O3) :
將11.25g NaOH溶于約100ml蒸餾水中,未冷卻前加入25g As2O3,最后用蒸餾水稀釋成250ml。
( 3)變色酸顯色劑
1) 4mol/L H2SO4:將濃H2SO4444ml慢慢地加入至1500ml蒸餾水中,在冰水浴中配制,待完全冷卻后,加水至終體積2L。
2)顯色劑: 400ml蒸餾水中,加入5g變色酸,加入4mol/L H2SO4至2L。
4.標(biāo)準(zhǔn)液
標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)為三油酸酯及三軟脂酸酯。
( 1)貯存液(含2mg/L)
1)稱三油酸酯200mg,溶于二氯甲烷至100ml。
2)稱三軟脂酸酯100mg,溶于二氯甲烷至50ml。
將上述兩液按2∶1的比例充分混合,此液含TG 2.327mmol/L。
( 2)工作液:
由貯存液稀釋至所需濃度。
( 3)劑量響應(yīng)曲線:
工作液( S1~S5)各10ml,分別加入硅酸2g、生理鹽水0.5ml后,與標(biāo)本同樣處理,繪制劑量響應(yīng)曲線。線性范圍超過3.723mmol/L則不可靠。任何標(biāo)本值高于此水平時(shí),應(yīng)稀釋后重新操作。
( 4)穩(wěn)定性:
標(biāo)準(zhǔn)貯存液與工作液應(yīng)放置4℃冰箱中,用帶塞的容器,以特氟隆( Teflon)條密封,每次取用后應(yīng)立即加蓋,并及時(shí)放進(jìn)冰箱,可穩(wěn)定6個(gè)月。超過6個(gè)月,因溶劑揮發(fā)可導(dǎo)致標(biāo)準(zhǔn)讀數(shù)值增高。